يعد إعداد شريحة الأنسجة الحيوانية تقنية أساسية في البحث البيولوجي والتعليم والتشخيص الطبي. كمورد مخصص لشرائح المجهر البيولوجيوشرائح المجهر المعدة، أنا أفهم أهمية الشرائح عالية الجودة للمراقبة والتحليل الدقيق. في هذه المدونة ، سأرشدك خلال الخطوة - من خلال - خطوة لإعداد شريحة أنسجة الحيوانات.
الخطوة 1: جمع العينات
الخطوة الأولى في إعداد شريحة الأنسجة الحيوانية هي جمع عينة الأنسجة المناسبة. يعتمد اختيار الأنسجة على البحث أو الغرض التشخيصي. على سبيل المثال ، إذا كنت تدرس بنية الكبد ، فستحتاج إلى الحصول على عينة أنسجة الكبد. عند جمع العينة ، من الأهمية بمكان اتباع الإرشادات الأخلاقية والقانونية. في مختبر أو بيئة طبية ، غالبًا ما يتم الحصول على العينات من الحيوانات التي تم التضحية بها بشكل إنساني أو أثناء العمليات الجراحية.
استخدم أدوات حادة ونظيفة ، مثل Scalpels أو مقص ، للحصول على قطعة صغيرة من الأنسجة. يجب أن يكون حجم عينة الأنسجة مناسبًا لخطوات المعالجة اللاحقة. بشكل عام ، فإن العينة التي يبلغ سمكها بضعة ملليمترات وبعض ملليمترات مربعة في المنطقة كافية. ضع الأنسجة التي تم جمعها فورًا في حل مثبت لمنع التحلل الذاتي (الهضم الذاتي) والتعفن.
الخطوة 2: التثبيت
التثبيت خطوة حرجة تحافظ على بنية الأنسجة. تعمل المثبتات عن طريق ربط البروتينات والجزيئات الكبيرة الأخرى في الأنسجة ، مما يمنع تدهورها. واحدة من أكثر المثبتات شيوعًا هو الفورمالديهايد ، وعادة ما يكون في شكل محلول فوراليين محايد بنسبة 10 ٪.
انغمس في عينة الأنسجة في التثبيت لفترة مناسبة. يعتمد وقت التثبيت على حجم ونوع الأنسجة. قد تتطلب عينات الأنسجة الأصغر فقط ساعات قليلة من التثبيت ، في حين أن الأنسجة الأكبر أو الكثيفة قد تحتاج إلى تثبيت أطول أو حتى تثبيت أطول. أثناء التثبيت ، تأكد من أن الأنسجة مغمورة تمامًا في التثبيت ، ويتم إغلاق الحاوية بإحكام لمنع التبخر.
الخطوة 3: الجفاف
بعد التثبيت ، يحتوي الأنسجة على كمية كبيرة من الماء. الماء لا يتوافق مع وسائط التضمين المستخدمة في الخطوة التالية ، لذلك يجب تجفيف الأنسجة. يتم تحقيق الجفاف عن طريق استبدال الماء تدريجياً في الأنسجة بمذيب عضوي ، وعادة ما يكون الإيثانول.
ابدأ بنقل الأنسجة الثابتة إلى سلسلة من حلول الإيثانول بتركيزات متزايدة. على سبيل المثال ، يمكنك استخدام سلسلة من 30 ٪ و 50 ٪ و 70 ٪ و 90 ٪ و 100 ٪ من الحلول الإيثانول. يجب أن تستمر كل خطوة لفترة كافية للسماح للإيثانول باختراق الأنسجة واستبدال الماء. تعتمد مدة كل خطوة على حجم ونوع الأنسجة ، ولكن عمومًا ، يمكن أن تتراوح من 30 دقيقة إلى عدة ساعات لكل تركيز.
الخطوة 4: المقاصة
المقاصة هي عملية إزالة عامل الجفاف (الإيثانول) من الأنسجة واستبدالها بعامل تطهير قابل للتخطيط مع وسيط التضمين. زيلين هو عامل تطهير شائع الاستخدام.
نقل الأنسجة المجففة إلى زيلين. سيصبح الأنسجة شفافة حيث يخترق الزيلين ويحل محل الإيثانول. يمكن أن يختلف وقت المقاصة من 30 دقيقة إلى بضع ساعات ، اعتمادًا على حجم الأنسجة وكثافة. من المهم أن نلاحظ أن الزيلين سامة ، لذلك يجب تنفيذ جميع العمليات التي تنطوي على زيلين في غطاء الدخان البئر.
الخطوة 5: التضمين
التضمين هو عملية المحيطة بالأنسجة بوسيلة صلبة توفر الدعم للقسمة. الشمع البارافين هو الأكثر شيوعا في التضمين.
ضع الأنسجة التي تم تطهيرها في شمع البارافين المنصهر. يجب توجيه الأنسجة بشكل صحيح في القالب للتأكد من تحقيق المستوى المطلوب للقسمة. اسمح لشمع البارافين بالتصلب في درجة حرارة الغرفة أو في الثلاجة. بمجرد أن تكون كتلة البارافين صلبة ، يمكن تقليصها إلى حجم مناسب للقسمة.
الخطوة 6: التقسيم
التقسيم هو عملية قطع الأنسجة المدمجة إلى شرائح رقيقة. يستخدم microtome لهذا الغرض. اضبط microtome على سمك القسم المطلوب ، والذي عادة ما يتراوح بين 4 و 10 ميكرومتر لمعظم عينات الأنسجة الحيوانية.
قطع بعناية كتلة البارافين إلى أقسام باستخدام microtome. سوف تطفو الأقسام على حمام مائي عند درجة حرارة أقل بقليل من نقطة انصهار شمع البارافين. هذا يساعد على تسطيح الأقسام وإزالة أي تجاعيد.
الخطوة 7: التثبيت
بعد التقسيم ، يجب تركيب أقسام البارافين على شرائح المجهر. استخدم شريحة زجاجية نظيفة واختر قسمًا من حمام الماء باستخدام الشريحة. اسمح للماء بالتبخر ، ثم ضع الشريحة على صفيحة ساخنة دافئة لمساعدة القسم على الالتزام بالشريحة.
الخطوة 8: deparaffinization و rehydration
قبل تلطيخ ، يجب إزالة البارافين من الأقسام ، ويجب إعادة ترطيب الأنسجة. ضع الشرائح المثبتة في زيلين لإزالة البارافين. بعد ذلك ، قم بنقل الشرائح عبر سلسلة من تركيزات الإيثانول المتناقصة (100 ٪ ، 90 ٪ ، 70 ٪ ، 50 ٪ ، و 30 ٪) لإروة الأنسجة.
الخطوة 9: تلطيخ
تلطيخ عملية إضافة لون إلى أقسام الأنسجة لتعزيز رؤية مكونات الخلوية والأنسجة المختلفة. تلطيخ الهيماتوكسيلين والإيوسين (H&E) هو طريقة تلطيخ الأكثر شيوعًا في الدراسات النسيجية.
هيماتوكسيلين بقع النوى الأزرق - الأرجواني ، في حين أن eosin تلطخ السيتوبلازم والمصفوفة خارج الخلية الوردي. أولاً ، وصمة عار على الأقسام المجمعة مع الهيماتوكسيلين لبضع دقائق. ثم ، شطف الشرائح بالماء وتمييز وصمة الهيماتوكسيلين باستخدام محلول الكحول الحمضي. بعد ذلك ، قم بتلطيخ الأقسام مع eosin لفترة قصيرة ، وعادة ما تكون بضع ثوان إلى دقيقة.
الخطوة 10: الجفاف والتركيب
بعد تلطيخ ، يجب تجفيف أقسام الأنسجة مرة أخرى لإزالة الماء ثم مثبتة باستخدام ساترة. نقل الشرائح الملطخة من خلال سلسلة من تركيزات الإيثانول المتزايدة (30 ٪ ، 50 ٪ ، 70 ٪ ، 90 ٪ ، و 100 ٪) لتجفيف الأنسجة. ثم ، نقل الشرائح إلى زيلين لمسح الإيثانول.
ضع قطرة من وسط التثبيت في القسم الملون ، ووضع ساترة فوقه بعناية ، وتجنب تكوين فقاعات الهواء. سوف تصلب وسيط التثبيت مع مرور الوقت ، وتأمين الساترة في مكانها وحماية القسم الملون.
مراقبة الجودة واستكشاف الأخطاء وإصلاحها
مراقبة الجودة هي جانب مهم من إعداد الشرائح. تحقق من الشرائح المعدة تحت المجهر للتأكد من أن الأقسام ذات جودة جيدة. ابحث عن علامات القطع الأثرية ، مثل الطيات أو الدموع أو تلطيخ غير متساو.
إذا كانت هناك طيات في الأقسام ، فقد يكون ذلك بسبب تقسيم غير لائق أو التعامل مع التثبيت. يمكنك محاولة تسطيح الطيات عن طريق تسخين الشريحة برفق على لوحة ساخنة. قد يكون سبب تلطيخ غير متساوٍ غير مكتمل ، أو أوقات تلطيخ غير لائقة ، أو مشاكل في حلول تلطيخ. في مثل هذه الحالات ، قد تحتاج إلى تكرار عملية تلطيخ أو ضبط ظروف تلطيخ.
خاتمة
يعد إعداد شريحة الأنسجة الحيوانية عملية معقدة ومتعددة الخطوة تتطلب اهتمامًا دقيقًا بالتفاصيل. كل خطوة أمر بالغ الأهمية للحصول على شرائح عالية الجودة يمكن أن توفر معلومات دقيقة حول بنية الأنسجة. كمورد لشرائح المجهر البيولوجيوشرائح المجهر المعدة، نحن نفهم احتياجات الباحثين والمعلمين والمهنيين الطبيين. يمكن أن تضمن شرائح المجهر عالية الجودة لدينا أفضل النتائج في دراستك وتشخيصاتك.
إذا كنت مهتمًا بشراء شرائح المجهر لدينا أو لديك أي أسئلة حول إعداد الشرائح ، فلا تتردد في الاتصال بنا لمزيد من المناقشة والتفاوض على المشتريات. نحن ملتزمون بتزويدك بأفضل المنتجات والخدمات لتلبية احتياجاتك العلمية.
مراجع
- Bancroft ، JD ، & Gamble ، M. (2008). نظرية وممارسة التقنيات النسيجية. تشرشل ليفينغستون.
- كيرنان ، JA (2008). الأساليب النسيجية والنسيجية: النظرية والممارسة. سبرينغر.
- Stevens ، A. ، & Lowe ، J. (2015). الأنسجة البشرية. إلسفير.
